Come scegliere la colonna corretta?
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Date:2021-11-04 17:32:46 Thursday
Summary: ① Matrice di impaccamento della colonna cromatografica A. Matrice di gel di silice: elevata purezza, basso costo, alta resistenza, facile modifica chimica, ma l'intervallo di pH è limitato. La maggior parte dei riempitivi a matrice di sil......
① Matrice di impaccamento della colonna cromatografica
A. Matrice di gel di silice: elevata purezza, basso costo, alta resistenza, facile modifica chimica, ma l'intervallo di pH è limitato. La maggior parte dei riempitivi a matrice di silice sono stabili tra pH 2-8, ma la fase legata con gel di silice appositamente modificato può essere stabilizzata a pH 1,5-10.
B. Matrice polimerica: ampio intervallo di pH di applicazione, temperatura stabile (l'alta temperatura può raggiungere oltre 80 gradi) e bassa resistenza meccanica.
②Forma delle particelle
La maggior parte dei moderni riempitivi HPLC sono particelle sferiche, ma a volte particelle irregolari. Le particelle sferiche forniscono una pressione della colonna inferiore, una maggiore efficienza e stabilità della colonna e una maggiore durata della colonna. Quando si utilizza una fase attiva ad alta viscosità; le particelle irregolari hanno una superficie specifica più ampia e un prezzo relativamente basso.
③ Dimensione delle particelle
Minore è la dimensione delle particelle, maggiore è l'efficienza e maggiore è la risoluzione, ma allo stesso tempo comporterà una maggiore caduta di pressione della colonna. Scegli un materiale di imballaggio da 1,5-3 μm per risolvere alcuni campioni complessi, UPLC può utilizzare un imballaggio da 1,5 μm; come colonna semi-preparativa o preparativa viene utilizzato un altro impaccamento di dimensioni delle particelle di 10 μm o superiore.
④Contenuto di carbonio
Il contenuto di carbonio di una colonna cromatografica si riferisce al rapporto tra la fase legata sulla superficie del gel di silice, che è correlato all'area superficiale specifica e alla copertura del legame. L'alto contenuto di carbonio migliora la capacità della colonna, la risoluzione e il tempo di analisi e viene utilizzato per campioni complessi che richiedono un'alta risoluzione; a basso contenuto di carbonio ha un tempo di analisi breve e mostra una selettività diversa e viene utilizzato per l'analisi rapida di campioni semplici e fasi attive ad alto contenuto di acqua. Campioni di condizioni. Generalmente, il contenuto di carbonio del C18 varia dal 7 al 19%.
⑤ Dimensione dei pori e superficie specifica
Il mezzo di adsorbimento HPLC è costituito da particelle porose e la maggior parte della superficie di reazione è nei pori. Pertanto, le molecole devono entrare nei pori per essere adsorbite e separate.
La dimensione dei pori della colonna cromatografica e la superficie specifica sono due concetti complementari. La dimensione dei pori è piccola e la superficie specifica è grande e viceversa. Ampia superficie specifica, aumenta la reazione tra il campione e la fase legata, aumenta la conservazione, il caricamento del campione e la separazione dei componenti complessi; piccola superficie specifica, tempo di equilibrazione veloce, adatto per l'analisi del gradiente.
⑥ Volume dei pori e resistenza meccanica
volume dei pori, noto anche come "volume dei pori". Si riferisce alla dimensione del volume vuoto per particella. Può riflettere bene la resistenza meccanica del riempitivo. I riempitivi con un grande volume dei pori hanno una resistenza meccanica leggermente inferiore rispetto a quelli con un piccolo volume dei pori. I riempitivi con un volume dei pori pari o inferiore a 1,5 mL/g vengono utilizzati principalmente per la separazione HPLC, mentre i riempitivi con un volume dei pori superiore a 1,5 mL/g vengono utilizzati per la cromatografia ad esclusione dimensionale e la cromatografia a bassa pressione.
⑦ tappo terminale
Il capping terminale della colonna può ridurre i picchi di scodamento dei composti basici polari a causa dell'interazione con i gruppi silanolici esposti. La fase legata non bloccata avrà selettività diversa rispetto alla fase legata bloccata, soprattutto per i campioni polari.
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