Risposte alle domande frequenti sulla coltura cellulare
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Date:2022-07-14 16:15:00 Thursday
Summary: 1. Se ricevo una fiala di cellule congelate, posso conservarla direttamente in azoto liquido? In molti casi, le cellule spedite su ghiaccio secco (-80°C) possono essere restituite all'azoto liquido e quindi scongelate rapidamente. Tuttav......
1. Se ricevo una fiala di cellule congelate, posso conservarla direttamente in azoto liquido? In molti casi, le cellule spedite su ghiaccio secco (-80°C) possono essere restituite all'azoto liquido e quindi scongelate rapidamente. Tuttavia, tale trattamento può ridurre la vitalità cellulare. Per alcune linee cellulari sensibili, ciò potrebbe rendere più difficile il recupero cellulare. Si pensa che questo fenomeno sia dovuto ai cambiamenti nella struttura dei cristalli di ghiaccio intracellulari dovuti ai cambiamenti di temperatura. Pertanto, si raccomanda di scongelare e coltivare le cellule il prima possibile dopo il ricevimento. È meglio ridurre il tempo di conservazione a -80°C, preferibilmente questa temperatura viene utilizzata solo per la spedizione. 2. Perché le cellule dovrebbero essere conservate nella fase gassosa anziché nella fase liquida in un serbatoio di azoto liquido? Le cellule vengono conservate in fase di azoto liquido per un più facile recupero. Nella fase liquida dell'azoto liquido, se il crioviale non è adeguatamente sigillato o perde, le cellule sono a diretto contatto con l'azoto liquido, che influenzerà la vitalità delle cellule dopo lo scongelamento. 
3. Come cambiare il mezzo per le cellule di sospensione? Le cellule in sospensione possono essere coltivate semplicemente aggiungendo mezzo fresco (se lo spazio lo consente) o staccando le cellule dal vecchio mezzo mediante centrifugazione (100 x g per 5 min), seguita da risospendere le cellule pellettate in mezzo fresco. Tuttavia, per la maggior parte delle linee cellulari in sospensione, la semplice aggiunta del mezzo è un approccio migliore. Entrambi i metodi richiedono che il mezzo venga aggiornato prima che le cellule raggiungano la loro densità di saturazione massima. La densità di saturazione delle cellule è compresa tra 3 x 10 5 e 2 x 10 6 a seconda della linea cellulare e delle condizioni di coltura (riposo o agitazione, livello di ossigenazione, ecc.). Le cellule devono essere diluite per ridurre le concentrazioni cellulari per consentire un sufficiente recupero dei nutrienti per mantenere le cellule in crescita logaritmica. Se il mezzo viene semplicemente cambiato senza ridurre la densità cellulare, le cellule esauriranno rapidamente il mezzo e moriranno. Se le cellule vengono diluite al di sotto della loro densità minima, entreranno in una fase di latenza, cresceranno molto lentamente o moriranno. Ogni linea cellulare in sospensione ha una densità di saturazione e un intervallo di passaggio diversi, quindi la conta cellulare giornaliera è il modo migliore per monitorare una linea cellulare in sospensione.
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