Come pulire e rigenerare la colonna dopo la contaminazione?
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Date:2021-11-25 16:42:09 Thursday
Summary: Quando una colonna cromatografica è contaminata, il suo comportamento cromatografico sarà leggermente diverso da quello di una colonna non contaminata. Le colonne contaminate possono causare problemi di contropressione. La colonna contaminata in ......
Quando una colonna cromatografica è contaminata, il suo comportamento cromatografico sarà leggermente diverso da quello di una colonna non contaminata. Le colonne contaminate possono causare problemi di contropressione. La colonna contaminata in fase inversa deve essere pulita e rigenerata per ripristinare le condizioni di funzionamento originali. La chiave per rigenerare una colonna HPLC contaminata è conoscere la natura del contaminante e trovare un solvente appropriato per rimuoverlo. Se la contaminazione è causata dall'accumulo di sostanze fortemente trattenute durante iniezioni ripetute, semplici passaggi per rimuovere questi contaminanti possono spesso ripristinare il comportamento cromatografico. A volte, dopo molte operazioni, la colonna cromatografica viene lavata con il 90-100% di solvente B (il solvente più forte nel sistema a fase inversa a due solventi) per 20 volumi per eliminare i contaminanti. Ad esempio, per i lipidi residui nella colonna possono essere utilizzati solventi non acquosi come metanolo, acetonitrile e tetraidrofurano. 
In generale, tutti i metodi di pulizia hanno forme simili. I solventi utilizzati aumentano con la forza del solvente. Spesso l'ultimo solvente è molto idrofobo (come l'acetato di etile o anche l'idrocarburo) e può essere utilizzato per sciogliere sostanze non polari come lipidi e oli. Dobbiamo assicurarci che ogni solvente in una serie di solventi possa essere miscelato con il solvente successivo. Al termine del processo di pulitura è necessario ripristinare il sistema solvente originale con l'ausilio di un solvente miscibile di media intensità. Ad esempio, l'isopropanolo è un ottimo solvente come passaggio intermedio perché è miscibile con n-esano o diclorometano e anche con solventi in fase acquosa. Tuttavia, la viscosità dell'isopropanolo è molto elevata e deve essere garantita una bassa portata per evitare una pressione eccessiva della pompa. Durante il lavaggio della colonna cromatografica, il liquido di lavaggio è collegato direttamente alla bottiglia dei rifiuti dall'estremità di uscita della colonna cromatografica e non può fluire attraverso la cella di rilevamento per evitare la contaminazione della cella di rilevamento. La colonna cromatografica a fase inversa non utilizza la soluzione tampone, utilizzare le seguenti serie di solventi per rigenerare: 100% metanolo → 100% acetonitrile → 75% acetonitrile-25% isopropanolo → 100% isopropanolo → 100% cloruro di metilene → 100% n-esano → 100% cloruro di metilene → 100% isopropanolo → 100% acetonitrile . La colonna per cromatografia in fase inversa utilizza una soluzione tampone, utilizzare la seguente serie di solventi per rigenerare: acqua → acetonitrile → cloroformio (o isopropanolo) → acetonitrile → acqua.
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